jetPEI®

Réactif pour la transfection d’ADN adapté au criblage à haut débit (HTS)

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Description du produit

Le réactif de transfection jetPEI® est un dérivé linéaire de polyéthylenimine, chimiquement défini et garanti sans composés d’origine animale, d’une efficacité de transfection prouvée et reproductible dans de nombreux types de cellules adhérentes et en suspension. De par l’excellente reproductibilité en efficacité de transfection, ainsi que la stabilité des complexes ADN/ jetPEI® dans le temps (jusqu’à 4 heures), jetPEI® est le réactif de transfection idéal pour réaliser des transfections à haut débit (HTS) soit en mode « forward », « reverse » ou « batch ».

Des protocoles adaptés pour vos expériences

Le protocole de transfection « forward » correspond à la méthode plus classique de transfection. Les cellules sont ensemencées la veille de la transfection, et les complexes ADN/jetPEI® sont ajoutés aux cellules adhérentes ou en suspension au moment de la transfection.

Le protocole de transfection « reverse » est idéal pour cribler un ensemble de gènes (HTS) faisant par exemple partie d’une banque d’ADN génomique (Fig. 1). Les complexes ADN/jetPEI® sont ajoutés aux puits avant l’ajout des cellules. La stabilité des complexes ADN/jetPEI® dans le temps (jusqu’à 4 heures) permet de réaliser des transfections à haut débit en toute sérénité.

Le protocole de transfection en « batch » a été développé pour augmenter la reproductibilité inter-puits en préparant une solution homogène de cellules transfectées. Les cellules adhérentes sont trypsinées et transfectées immédiatement en suspension, avant de répartir les cellules transfectées dans chaque puits. Ce protocole est adapté au criblage de molécules pharmaceutiques en particulier puisqu’il permet d’ensemencer et de transfecter les cellules le même jour.

jetPEI HTS Protocol

Fig. 1 : Protocole « reverse » de jetPEI® adapté au criblage de gènes à haut débit (HTS).

Stabilité des complexes de transfection

jetPEI® étant un polymère hydrosoluble, les complexes ADN/jetPEI® sont stables dans le temps contrairement à ceux préparés avec les réactifs de transfection lipidiques ou le phosphate de calcium. Les complexes ADN/jetPEI® garantissent une efficacité de transfection identique jusqu’à 4 heures après leur préparation, facilitant ainsi la distribution à haut débit des complexes dans des plaques multipuits (Fig. 2).

jetPEI - Transfection Complex stability
Fig. 2 : Effet du temps d’incubation des complexes ADN/jetPEI® sur l’efficacité de transfection. Des cellules HEK-293 ont été transfectées avec le plasmide pCMVLuc grâce à jetPEI® dans des plaques 96 puits, en suivant le protocole de transfection « reverse ». L’activité de la luciférase a été mesurée au bout de 24h.

Reproductibilité entre lots

La transfection à haut débit (HTS) avec jetPEI® permet d’obtenir une efficacité de transfection reproductible en utilisant différents lots de jetPEI® (Fig. 3).

jetPEI - Batch to batch reproducibility
Fig. 3 : Excellente reproductibilité inter-lots de jetPEI®. Pour chaque lot de jetPEI®, des cellules HeLa ont été transfectées en triplicats en présence de sérum dans des plaques 24 puits, selon le protocole standard.

Efficacité de transfection dans un grand nombre de types cellulaires

jetPEI® est un réactif de transfection efficace pour la délivrance d’ADN dans un grand nombre de lignées cellulaires adhérentes ou non-adhérentes, ainsi que dans les cellules primaires (Tableau 1). Plus de 550 publications citant jetPEI® sont accessibles en suivant ce lien: Polyplus-transfection Database. Vous pourrez également y trouver des protocoles optimisés pour la transfection de plus de 400 lignées cellulaires et cellules primaires.

jetPEI - Examples of successfully transfected cells lines

Tableau 1. Liste non-exhaustive de lignées cellulaires et cellules primaires communément utilisées dans lesquelles jetPEI® a une efficacité de transfection élevée.

Efficacité de transfection supérieure

jetPEI® surpasse les autres réactifs de transfection présents sur le marché (Fig. 4) avec une efficacité de transfection supérieure et une variabilité inter-puits négligeable (faible écart-type).

jetPEI vs competitors
Fig. 4 Comparaison de l’efficacité de transfection avec jetPEI® par rapport aux concurrents. Des cellules HeLa ont été transfectées avec 1 µg de plasmide pCMV-Luc, en présence de sérum 10% dans des plaques 24 puits, selon le protocole standard. L’expression de la luciférase a été mesurée 24 h après transfection.

 

Citations

Voici une courte sélection de publications mentionnant l’utilisation de jetPEI®. L’ensemble de notre base de donnée bibliographique est accessible en suivant ce lien: Polyplus-transfection Database.

Elkan-Miller, T., Ulitsky, I., Hertzano, R., Rudnicki, A., Dror, A. A., Lenz, D. R., Elkon, R., Irmler, M., Beckers, J., Shamir, R., Avraham, K. B. (2011). Integration of Transcriptomics, Proteomics, and MicroRNA Analyses Reveals Novel MicroRNA Regulation of Targets in the Mammalian Inner Ear., PLoS One 6, e1819.

Gerlo, S., Haegeman, G., Vanden Berghe, W. (2008). Transcriptional regulation of autocrine IL-6 expression in multiple myeloma cells., Cell Signal 20, 1489.

Melkman-Zehavi, T., Oren, R., Kredo-Russo, S., Shapira, T., Mandelbaum, A. D., Rivkin, N., Nir, T., Lennox, K. A., Behlke, M. A., Dor, Y., Hornstein, E. (2011). miRNAs control insulin content in pancreatic beta-cells via downregulation of transcriptional repressors., EMBO J 30, 835-4.

Rogowski, K., van Dijk, J., Magiera, M. M., Bosc, C., Deloulme, J. C., Bosson, A., Peris, L., Gold, N. D., Lacroix, B., Grau, M. B., Bec, N., Larroque, C., Desagher, S., Holzer, M., Andrieux, A., Moutin, M. J., Janke, C. (2010). A family of protein-deglutamylating enzymes associated with neurodegeneration., Cell 143, 564-7.

Zhao, L. J., Kuppuswamy, M., Vijayalingam, S., Chinnadurai, G. (2009). Interaction of ZEB and histone deacetylase with the PLDLS-binding cleft region of monomeric C-terminal binding protein 2., BMC Mol Biol 10, 89.

Qualité

Polyplus-transfection® est certifiée ISO 9001 depuis 2002 et ce niveau de certification assure aux clients que le fournisseur a établi des procédés fiables pour le développement, la fabrication, la vente du produit et le support aux clients.
Chaque lot de jetPEI® est testé st testé par transfection d’ADN (pCMV-Luciferase) dans des cellules HeLa. Chaque tube de réactif est livré avec un certificat d’analyse.