jetCRISPR™

Réactif de transfection de RNP pour l’édition de génome

jetCRISPR vFR - Points clés

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jetCRISPR vFR - Résumé

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jetCRISPR ref FR

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Description du produit

Le système optimisé CRISPR/Cas9 est un outil puissant et hautement spécifique pour l’édition de génome. Ce système bipartite comporte une molécule d’ARN guide (ARNg) qui permet de diriger la nucléase Cas9 vers une séquence cible spécifique dans le génome, afin de modifier celle-ci par mutation, insertion ou délétion.

jetCRISPR™ est un réactif innovant spécialement conçu pour délivrer la Ribonucléoprotéine (RNP) au cours d’une expérience utilisant le système CRISPR/Cas9. jetCRISPR™ permet d’obtenir une haute efficacité d’édition de génome tout en préservant la morphologie et la viabilité cellulaire.

Vous aussi, utilisez cette technologie de pointe pour la délivrance de la RNP CRISPR/Cas9 !

Haute efficacité pour l’édition du génome

jetCRISPR™ a été spécialement conçu pour délivrer la RNP (ARN guide et complexe protéique CRISPR/Cas9) avec une haute efficacité de transfection, permettant ainsi d’obtenir une haute efficacité d’édition de génome par Cas-9 sur un large éventail de séquences cibles dans de nombreux types cellulaires. (Fig. 1 & 2).

jetCRISPR - Genome editing efficiency
Fig. 1: Haute efficacité de transfection avec jetCRISPR™ dans des cellules HeLa. Les transfections de RNP ont été réalisées dans des cellules HeLa en utilisant différentes concentration de RNP comprenant la protéine Cas9 et l’ARNsg HPRT1 ou le contrôle négatif, avec 0.3 µl de réactif jetCRISPR™, dans des plaques 96 puits. 48h après transfection, les produits de digestion par l’endonucléase T7 ont été chargés sur un gel d’agarose 2%, colorés au BET après migration et visualisés par G:Box transilluminator (Syngene®). Les images ont été acquises avec le logiciel Genesnap (Syngene®) et les quantifications d’Indel réalisées avec le logiciel Genetools (Syngene®).
1: Fragment complet de 1083bp ; 2: Fragment de restriction long de 827bp ; 3: Fragment de restriction court de 256bp.

jetCRISPR - Comparison of genome editing efficiency
Fig. 2: Haute efficacité d’édition de génome obtenue avec jetCRISPR™ en comparaison avec Lipofectamine® CRISPRMAX™. La transfection de RNP dans les cellules A549 et HEK-293 a été réalisée avec 30 nM RNP (protéine Cas9 et sgARN HPRT1) et 0.3 µl de réactif jetCRISPR™ ou 0.3 µl de Lipofectamine® CRISPRMAX™, par puits en plaque 96 puits. 48h après la transfection, l’efficacité d’édition de génome a été évaluée en calculant le pourcentage (%) d’Indel (%) par la méthode de l’endonucléase T7. Le % Indel a été determiné avec le logiciel Genetools (Syngene®).

Excellente viabilité cellulaire

Chez Polyplus-transfection, nous sommes fiers de proposer des réactifs qui préservent la viabilité et la morphologie des cellules sur toute la durée d’une expérience. Puisque jetCRISPR™ est compatible avec le sérum et les antibiotiques, alors la transfection de RNP peut être réalisée dans des conditions optimales afin de garder les cellules en culture saines. (Fig. 3).

jetCRISPR - Cell Viability
Fig. 3: Excellente viabilité cellulaire et morphologie préservée 48h après transfection avec jetCRISPR™. La transfection de RNP dans les cellules HEK-293 et A549 a été réalisée avec 30 nM RNP (protéine Cas9 et sgARN HPRT1) et 0.3 µl de réactif jetCRISPR™ par puits en plaque 96 puits. 48h après la transfection, la morphologie cellulaire a été visualisée en contraste de phase sur imageur ZOE Fluorescent Cell Imager (BIORAD®).

Edition de gène rapide et fiable

Lorsqu’on délivre directement la protéine Cas9 au lieu d’un plasmide, l’édition de génome démarre plus rapidement car la protéine est déjà disponible et opérationnelle. Ainsi, le fait de délivrer simultanément la protéine Cas9 et l’ARNg avec jetCRISPR™ permet une édition de gène rapide et fiable (Fig. 4). De plus, la protéine Cas9 étant éliminée des cellules bien plus rapidement qu’un plasmide, cela minimise les effets dits « off-target » (aspécifiques) et conduit à une édition de génome plus spécifique. (Kim S, et al; Genome Research 2014; 24:1012–1019).

jetCRISPR - Fast and reliable gene editing
Fig. 4: Edition de génome rapide et fiable obtenue avec jetCRISPR™ en cellules HEK-293. La transfection de RNP dans des cellules HEK-293 a été réalisée avec 30 nM de RNP (protéine Cas9 et sgRNA HPRT1) et 0.3 µl de réactif jetCRISPR™ en plaque 96 puits. 48h après la transfection, l’édition de génome a été évaluée en calculant le pourcentage (%) d’INDEL par la méthode de l’endonucléase T7. Le % d’INDEL a été déterminé avec le logiciel Genetools (Syngene®).

Facile à utiliser

jetCRISPR™ est une solution prête à l’emploi. Ainsi la transfection de RNP est grandement simplifiée et ne nécessite que quelques étapes : former les complexes RNP, y ajouter le réactif de transfection et répartir ce mélange dans les puits !

jetCRISPR™ est parfaitement adapté aux protocoles de transfection reverse et forward, vous permettant ainsi de choisir le protocole selon les cellules que vous cultivez, le format de plaque de culture et le temps d’analyse. En utilisant le protocole reverse (Fig. 5), vous obtiendrez les données un jour plus tôt qu’avec le protocole forward.

jejetCRISPR protocol - Reverse
Fig. 5: Protocole jetCRISPR™ reverse.

Applications

Pour obtenir une haute efficacité d’édition de génome et générer de nouveau modèles cellulaires ou animaux, il faut réussir la délivrance conjointe d’ARNg et de la protéine Cas9 à l’intérieur des cellules. Les solutions permettant de s’affranchir de la transfection d’ADN au profit de la protéine Cas9 intégrée dans un complexe protéine/ARNg (RNP) sont devenus hautement attractives, car elles permettent à la fois de surmonter l’obstacle de l’entrée d’ADN dans le noyau et également d’éviter l’intégration d’ADN dans le génome. De plus, en délivrant directement la protéine Cas9 la quantité présente est mieux contrôlée, et cela permet de limiter l’activité nucléase aspécifique. Toutes ces raisons font que les chercheurs ont sans aucun doute besoin d’un réactif de transfection efficace pour cette application spécifique.

Nous fournissons à présent une gamme complète de réactifs adaptés à vos expériences CRISPR (Tableau 1 & Fig. 6):

  • jetCRISPR™ pour la délivrance de RNP – co-délivrance de protéine Cas9 et ANR guide
  • jePRIME® pour les approches basées sur la transfection d’ADN plasmidique CRISPR
  • jetMESSENGER® pour la transfection d’ARN (cotransfection d’ARN guide et d’ARNm)
  • in vivo-jetPEI® pour l’édition de gène in vivo grâce à la délivrance d’ADN (Zuckermann et al. (2015) Nat Commun6, 7391; He et al. (2016) PLoS Pathog 12. E1005743)

Polyplus-transfection - Table CRISPR reagents

Table 1: Une gamme complète de réactifs de transfection pour les expériences CRISPR.

Fig. 6: Polyplus-transfection - Product range for CRSIPR experiment

Fig 6: Panel de réactifs de transfection CRISPR pour les expériences in vitro.

Qualité

Chaque lot de jetCRISPR™ est testé par transfection de cellules HEK-293 selon un protocole reverse en plaques 96 puits, avec 30 nM de RNP ciblant le gène HPRT1 et 0.3 µL de jetCRISPR™. Le pourcentage d’INDEL (%) est quantifié 48 heures après transfection par analyse avec l’endonucléase T7. Chaque tube de réactif est livré avec un certificat d’analyse.