PEIpro®

1-大规模生产病毒

Points importants PEIpro

2-产品规格

Specifications PEIpro CN

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3-概述

PEIpro®是一种化学合成的DNA 转染试剂,它提供的灵活性和可扩展性为生产病毒载体提供了一个强大和可持续的开发过程。得益于PEI 聚合物化学及配方的广泛深入的研发,PEIpro®在贴壁细胞和悬浮细胞培养系统中均可获得最高的转染效率。在工艺开发过程中以 PEIpro® 建立的实验方案,可直接用于临床前及临床级病毒载体的大规模生产中需使用的更高质量级别的PEIpro®:PEIpro®-HQ 与 PEIpro®-GMP。

4-订购信息

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5-产品介绍

5.1- 易于放大的病毒生产的优化 PEI 转染试剂

PEIpro® 转染试剂性能独特,能够高效的包裹多种不同大小的质粒,非常适合作为含目的基因和必要病毒成分的多个质粒的最佳共转染,以生产完整的重组病毒体。大量的产品开发使PEIpro®具备从工艺开发到放大生产的灵活性与稳定性。适用于目前市售的各种贴壁以及悬浮的病毒生产体系(尤其是 AAV 和慢病毒)(表 1)。关于使用 PEIpro® 生产 AAV 、慢病毒及其他类型病毒(腺病毒、逆转录病毒病毒样颗粒 (VLP))等的相关文献,请参阅:PEIpro 文献

表 1. PEIpro® 是在贴壁和悬浮细胞培养体系中生产病毒的首选转染试剂 对于慢病毒和 AAV 来说,无论细胞培养体系和生产规模如何,PEIpro® 与 PEIpro®-HQ 的有效病毒载体产量分别高于107 IG/mL 和 109 VG/mL。

就细胞培养条件和收获而言,悬浮细胞培养系统在简化放大工艺上具有相当大的优势。对应市面上已有数种不含动物性成分的商用型合成培养基,可用于保持悬浮细胞系的高产量。
典型的,使用 PEIpro® 转染悬浮的 HEK-293T 细胞都可以获得较高产量的AAV 和慢病毒(图 1)。

图 1:在BalanCD® HEK293反应器 (Irvine Scientific®)中,悬浮HEK-293T 和 HEK-293 细胞生产的慢病毒和 AAV。HEK-293T(慢病毒)和 HEK-293 (AAV) 细胞分别解冻后传代培养3~4天转入2L的生物反应器中。细胞接种和培养 3 天后再用 PEIpro® (Polyplus-transfection®) 进行转染。慢病毒使用 4 质粒共转,而 AAV 使用 3 质粒。转染后 48 小时和 72 小时检测慢病毒和 AAV 的滴度(本数据由 Genethon 友情提供)。

固定床生物反应器也是一种有吸引力的扩大培养模式,因为它们允许在低剪切应力条件下培养贴壁细胞,从而提高体积生产力。搭配使用 PEIpro®,在固定床反应器 iCELLis® (Pall)中已成功地实现了可规模化病毒载体的生产开发。例如,在将重组体 AAV-8 (rAAV-8) 从 0.8m2 放大培养至 4 m2 iCELLis® 纳米生物反应器的生产过程中,已有的 PEIpro® 转染方案可以直接线性放大而无需进一步优化。在 4 m2 iCELLis® 纳米生物反应器中获得的病毒产量,证明了它的可扩展性和稳定性。详细信息,请见 这里。

5.2-经优化的产品,区别于其他普通 PEI 和磷酸钙

PEIpro® vs 普通 PEI
大量的研发投入以及由 Polyplus-transfection® 开发的制造工艺,加上从聚合物结构、脱乙酰度、多分散指数和分子量方面的聚合物化学和配方的广发研发,使得PEIpro®成为独特的基于 PEI 的转染试剂。因此,PEIpro® 是所有市售 PEI商品 的黄金标准,其仅需最低的 DNA 量和试剂体积即可保证高产量的重复性(图 2)。

图 2:与其他 PEI 相比,PEIpro® 仅需更少的试剂和最低量的 DNA 量。悬浮 HEK-293 细胞以 1 x 106 个/ml 接种在无血清培养基中,使用重悬于 1 mg/ml 的PEIpro®、PEI“Max”及 L-PEI 25 kDa(Polysciences, Warrington, PA)进行转染。转染 48 小时后,使用常规荧光素酶测定法测定荧光素酶的表达。

PEIpro® vs 磷酸钙
目前已知磷酸钙 (CaPO4) 转染悬浮细胞的效率很低,所需质粒 DNA 的量多而导致成本高昂,并且由于络合作用中的几个参数波动(pH、钙和磷酸盐浓度等)导致结果不一致。 与 CaPO4 相比,PEIpro® 在贴壁细胞和悬浮细胞中均有70% ~ 90%的高效转染率,从而获得更高的病毒滴度(图 3)。

图 3:与基于 CaPO4 的化学转染相比,PEIpro® 的病毒产量更高。在每个75 cm2摇瓶中,用无血清培养基培养贴壁 HEK-293 细胞生产慢病毒,使用15 µg DNA 和 30 µl PEIpro®。转染 48h 后,用流式细胞术检测上清液中的病毒滴度。

5.3-卓越的批次间一致性

PEIpro® 采用严格受控的制造工艺配制而成。通过确保实验的可重复性,无论操作者是谁,PEIpro® 都极大地促进了工艺标准化,这是大规模生产的关键优势。此外,PEIpro® 的放行采用了先进的质量控制,包含确保批次间一致性的转染效率规范(图 4)。

PEIpro - reproductibility IgG3

图 4: PEIpro® 可确保批次间蛋白产量具有良好的重复性。悬浮 HEK-293 细胞以 1 x 106 个/ml 接种在无血清培养基中,按照标准说明使用 PEIpro® 进行转染。转染 48 小时后,采用Protein G 亲和定量(HPLC) 测定 IgG3-Fc 的产量。

5.4-引文

以下是PEIpro® 的相关参考资料,如需了解更多内容,请查阅我们的 Polyplus-transfection 数据库

5.5-客户评价

Genethon 非常自豪使用 PEIpro 来生产用于临床前的慢病毒和 AAV。

PEIpro® 完全是人工合成的,不含任何动物源性成分。在制造过程中,通过合理的控制测试对 PEIpro® 的质量进行持续的评估和记录。对于生产的每一批次,均进行进一步的系统批次管理和放行测试。在适合生物制造的条件下,通过合格的转染试验来确保转染效率的可靠性和可重复性。PEIpro® 根据药典规定的标准进行无菌性、支原体和细菌内毒素的检验。可按需提供 QC 的详细清单(联系技术支持团队
此外,自 2002 年以来,Polyplus-transfection® 获得 ISO 9001 质量管理体系认证;这一级别的认证向全球客户保证,供应方已经为产品开发、制造、销售和客户支持建立了可靠有效的流程。