INTERFERin®

1-转染siRNA、miRNA及其它寡核苷酸

INTERFERin CH Arguments de vente vB

 

2-基本信息

INTERFERin CH Informations générales vB

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3-可用参考

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4-产品说明

INTERFERin®仅使用1 nM siRNA就能有非常高的基因沉默效率,而且能用于各种贴壁细胞和悬浮细胞。低浓度siRNA可避免脱靶效应,加上其温和的作用方式,能确保获得更有说服力的数据以及绝佳的细胞活性。试剂非常易用,而且兼容血清和抗生素,INTERFERin®能完美用于miRNA及其它寡核苷酸(例如:前体miRNA、miRNA模拟物和反义miRNA等)的转染。

5-更少siRNA,更少脱靶效应

多篇文献表明,转染低浓度的siRNA可避免脱靶效应,这在高浓度siRNA转染中发现的非特异副作用1,2。因此使用尽可能少量的siRNA可以最大限度减少非特异性反应,确保数据可靠。这就是专门研发INTERFERin® 以少量siRNA产生高沉默效率的原因。INTERFERin®转染1nM特定siRNA,就能有选择性和高效的敲除基因表达,而其竞争试剂(L2K)需要至少10nM siRNA才能达到50%的沉默效率(图1)。

INTERFERin - Graphic comparison L2K

图1:INTERFERin®仅需要1nM siRNA便可有沉默基因。稳定表达萤火虫荧光素酶的3LL细胞,被INTERFERin® 与L2K分别转染抗Luc siRNA。 48小时后检测荧光素酶表达。对照 siRNA未发现抑制作用。

10pM siRNA也能获得50%的沉默效率(图2)。

Fig. 2 INTERFERin - Graphic inhibition

图2:INTERFERin®即使在极低浓度siRNA时也能获得很高的沉默效率。 A549-GL3Luc细胞在有血清的培养液中通过INTERFERin®转染浓度梯度降低的anti-Luc siRNA。 48小时后用传统方法检测荧光素酶的表达。对照 siRNA未发现抑制作用。

使用INTERFERin®转染1 nM siRNA以沉默内源核纤层蛋白A/C,可将核纤层蛋白基因表达大幅降至几乎无法检出(图3)。

INTERFERin - Gene silencing

图3:使用 INTERFERin®转染1nM siRNA可产生高效、特异性基因沉默。CaSki细胞通过INTERFERin®转染 1nM核纤层蛋白A/C siRNA 。48小时后,通过免疫荧光显微镜检测核纤层蛋白A/C沉默效率。

1. Birmingham, A.等人(2006年)《自然方法》第3期,199—204页。
2. Caffrey, D.等人(2011年)《公共科学图书馆·综合》2011年;6(7):e21503。电子版2011年07月05日。

6-适于miRNA转染

microRNA(miRNA)寡核苷酸的转染常用于分析特定miRNA对细胞功能的生物效应。INTERFERin®是转染miRNA、miRNA模拟物或前体miRNA的必选试剂。INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA转染试剂,专为在各类细胞中取得较高的转染效率而设计,能产生较高的基因沉默或者基因表达的刺激。通过与目标基因启动子联合,一些miRNA确实也能诱导基因表达。例如,miR-373的INTERFERin®介导递送会导致E-钙黏蛋白的表达增加3倍(图4)。

Transfection of miR-373 with INTERFERin® induces 3-fold increase of E-cadherin expression

图4:用INTERFERin®对miR-373进行转染能提升E-钙黏蛋白的表达。在miR-373(25 nM)及每孔用8微升INTERFERin®的助力下,PC-3细胞在6孔培养板上进行增殖和转染。转染72小时后,通过RT-qPCR来测定E-钙黏蛋白mRNA的表达情况。用HPRT-1基因表达对测定结果进行规范化。

INTERFERin®的阳离子组分只需要很少的寡核苷酸,就能获得温和的转染。另外,易用且稳健的方案确保了有重复性的结果。诸如miRNA之类的寡核苷酸能用少量INTERFERin®进行转染,导致强劲的基因沉默或者对基因表达的刺激作用。无论使用多少数量的INTERFERin®,都会产生几乎相同的效果,这使INTERFERin®成为一种经济节省的试剂。例如,使用不同数量的INTERFERin®所产生的倍数变化永远介于1.5和1.8之间(图5)。

10 nM miR-373 transfected with 6 µl INTERFERin® in PC-3 cells result in 1.8-fold increase in E-cadherin expression.

图5:INTERFERin®在用量很少时也非常有效。在miR-373(10 nM)及每孔用4微升、6微升或8微升INTERFERin®的助力下,PC-3细胞在6孔培养板上进行增殖和转染。转染72小时后,通过免疫印迹来分析E-钙黏蛋白的表达情况。用β-肌动蛋白表达对测定结果进行规范化。

较高的转染效率以及绝佳的细胞活性使INTERFERin®成为对科技文章提供相关数据的必选 试剂。自INTERFERin®问世以来,用它进行miRNA及miRNA相关分子转染的文章一直呈指数级增长。

INTERFERin - Number of publications

图6:用INTERFERin®进行miRNA转染的文章越来越多(谷歌学术搜索)。

7-基因沉默效率超过90%

对于贴壁细胞系或原代细胞,1nM siRNA足以获得超过90 %的基因沉默效率。对于悬浮细胞系来说,INTERFERin®用5nM siRNA(表1)也可以获得80%的沉默效率。

INTERFERin - Cell table
表1:通过INTERFERin®成功转染细胞系及获得的沉默效率。

8-细胞存活率高

就细胞存活率而言,INTERFERin® 要优于其他转染试剂。转染1nM siRNA 48 小时后,用INTERFERin®转染的细胞看起来很健康,而用试剂S转染的细胞可清晰监测到毒性反应(图7)

INTERFERin - Comparison of cell morphology

图7:INTERFERin® 对细胞作用非常温和。上图为INTERFERin® 或竞争试剂转染siRNA48小时后细胞形态对照。按照说明书,在含血清的培养基中A549-GL3Luc细胞用 INTERFERin®或竞争试剂 S或H转染1nM的Luciferase siRNA。

9-操作步骤简单

INTERFERin® 属于即用型试剂,操作过程简单。使用1nM的siRNA作为起始浓度在多种细胞中可使大多数基因沉默(图8)。INTERFERin®与血清和抗生素均兼容,因此无需考虑培养基的更换和洗涤; INTERFERin® 可以留在细胞内而不产生任何有害影响。

INTERFERin - Protocol
图8: INTERFERin®24孔板标准程序

请关注基因工程和生物技术新闻中我们的专家提示。

视频使用INTERFERin®进行siRNA转染

v.youku.com/v_show/id_XMzYwNzQ4NTc2.html

10-应用

10.1-RNA干扰

我们的INTERFERin®试剂非常适合进行RNA感染实验,即由siRNA产生的基因表达抑制这符合由siRNA促进的基因表达的特异性抑制。siRNA是植物、蠕虫和哺乳动物细胞质中存在的与特定基因互补的双链RNA,可用INTERFERin®在细胞内高效地进行转染。

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11-品质

每批INTERFERin®都在关于A549-Luc的转染测定试验中经过内部测试,能够结构性地表达荧光素酶基因。在每批产品的分析证书上都标注了1 nM siRNA条件下用INTERFERin®获得的基因沉默效率。