in vivo-jetPEI ®

1-用于活体验证简单安全的转染

in vivo-jetPEI CH Arguments de vente vB

 

2-基本信息

in vivo-jetPEI CH Information générales vB

3-可用参考

in vivo-jetPEI CH Références disponibles vB

经客户要求可提供大包装。如有需求,请联系我们。

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4-产品说明

in vivo-jetPEI ®是一种强效聚合物,可用于在各种动物模型中转染核酸。操作与经典转染相似:将核酸和试剂混合后,注射给动物。in vivo-jetPEI ®与核酸形成稳定的复合物,保护其免遭降解,进而促进活体转染。其有效性已得到充分验证(超过200篇相关文章)in vivo-jetPEI ®可通过各种注射途径用于各类器官。

5-适于DNA、siRNA、miRNA、寡核苷酸和mRNA的体内转染

in vivo-jetPEI ®是在各种组织中研究基因表达调控或基因沉默,理想的转染试剂。这类转染系统的可靠性在于将适量的核酸转入目标组织或者器官中,同时保持低毒性、免疫反应最小。in vivo-jetPEI ®的用途广泛,适于转染质粒DNA(图1)、siRNA(图2)、shRNA、miRNA、寡核苷酸和mRNA。

in vivo-jetPEI - Protein expression following plasmid DNA systemic delivery

图1:使用in vivo-jetPEI ®进行质粒DNA转染后的蛋白表达。转染24小时后,用IVIS 100(Caliper-PerkinElmer)拍摄的裸鼠体内荧光素酶表达。pCMVLuc(50µg)与in vivo-jetPEI ®在400µl的5%葡萄糖溶液中混合,然后进行尾静脉注射。

in vivo-jetPEI - siRNA mediated silencing of protein expression using in vivo-jetPEI® (control).in vivo-jetPEI - siRNA mediated silencing of protein expression using in vivo-jetPEI® (anti-luc).

图2:应用in vivo-jetPEI ®进行siRNA介导基因沉默的蛋白表达。质粒DNA和siRNA共转24小时后,用制冷CCD照相机拍摄的活裸鼠体内荧光素酶表达。将pCMVLuc(50µg)与10mg的siRNA(上臂:对照siRNA;下臂:anti-luc siRNA)混合到400µl的5%葡萄糖溶液中,然后进行尾静脉注射。

6-易用的两步式方案

in vivo-jetPEI ®是一种非常易用的转染试剂。在5%葡萄糖溶液中分别制备核酸和转染试剂,将它们混合在一起,在室温条件下放置15分钟,将形成的核酸/in vivo-jetPEI ®复合物注射到动物体内(图3)。该方案适于任何注射途径及任何动物种属。

in vivo-jetPEI - Protocol

图3:in vivo-jetPEI®操作。操作简单方便,可用于各种动物模型,各种注射途径和各种类型核酸。

7-多种注射途径,针对不同器官。

in vivo-jetPEI ®/核酸复合物的稳定性高,可用各种注射途径,如全身或局部(图4)。

In vivo-jetPEI - injection pathways

图4:在小鼠中使用in vivo-jetPEI ®的注射途径示例。

注射途径在很大程度上决定了转入的器官。如:进行静脉内注射,in vivo-jetPEI®将大部分DNA转染到肺,同时在肝脏、胰脏、脾脏、肾脏、心脏、膀胱和动脉中也有部分转染(图5)。

in vivo-jetPEI - Organs

图5 in vivo-jetPEI ®在小鼠全身注射,核酸转染的器官。将pCMVLuc(50µg)与in vivo-jetPEI ®混合到400µl的5%葡萄糖溶液中,尾静脉注射。转染24小时后,提取器官并用荧光素酶检测法检测各个器官内荧光素酶含量,及总蛋白占比。

除静脉注射外,in vivo-jetPEI ®还适于局部转染,例如:局部施用、大脑内和关节内注射,而且这是将核酸转染到皮下肿瘤模型内的最佳方案。可转染的目标器官有:肺、肝脏、大脑、胰脏、脾脏、肾脏、心脏、膀胱、皮肤、视网膜和动脉等。我们的转染专家可以针对客户的情况来定制具体的实验方案,并发送相关的文献资料(如有需要,请发送邮件至support@polyplus-transfection.com联系我们的技术支持小组)。客户还可以下载关于小鼠体内实验的准则和协议,以及包含Polyplus-transfection试剂参考文献(按注射途径或目标器官/组织进行分类)的技术注解。

8-适于任何动物模型

in vivo-jetPEI ®是小鼠核酸转染的理想之选。由于该方案简单易行,用途广泛,因此可以对其进行修改以用于其它动物,如:大鼠、豚鼠、仓鼠、狗、兔、猴子、山羊、绵羊、奶牛、土拨鼠、鸡、鹌鹑、鸭子、鸽子、壁虎、蝌蚪、虾、斑马鱼、鲍鱼、蜗牛、水蛭和蚊子等。我们的转染专家可以针对客户的实验动物定制方案,并发送相关的文献(如有需要,请发送邮件至support@polyplus-transfection.com联系我们的技术支持小组)。

9-全球范围内用于各类治疗和临床试验

in vivo-jetPEI®具有极高的安全性和转染效率,已被数个药物开发计划选为转染介质。目前有几个针对癌症、心脏病、外伤性脑损伤和HIV免疫基因治疗的I期和II期临床试验采用in vivo-jetPEI ®(图6)。如需了解在细胞治疗试验中使用Polyplus公司转染®试剂的实例,请访问加拿大OHRI网站。

Fig.1: Clinical pipeline of ongoing preclinical and clinical trials using in vivo-jetPEI®

图6:正在进行使用 in vivo-jetPEI®的临床试验。

10-安全:不会触发炎症性反应

in vivo-jetPEI®进行全身核酸注射后,不会诱导生成主要的促炎性细胞因子,血清中的肝酶含量也不会增加(Bonnet et al. (2008), Pharm Res, 25:2972)(图6)。因此,对会引起免疫反应的病毒载体而言,in vivo-jetPEI ®是可靠和安全的替代。

in vivo- jetPEI - Inflammatory response

图7:核酸/in vivo-jetPEI ®复合物进行静脉内注射后不会诱发促炎性细胞因子。使用或不使用in vivo-jetPEI ®对AsiRNA(40µg)进行转染。1小时、6小时、12小时和6小时后,分别测量TNF-α、IL12/IL23、IFNγ和IL6的含量。阴选对照为葡萄糖,阳性对照是E.Coli LPS(50µg)的IP注射。

11-核酸/in vivo-jetPEI®复合物的稳定性

核酸与in vivo-jetPEI ®形成的复合物长时间保存不会产生沉淀,可在室温、4℃和37℃至少能稳定24小时(图8)。借助这些稳定的复合物,核酸能获得更久的保护,进而可以事先制备复合物,或者用渗透泵进行持续转染。

in vivo-jetPEI - Complexe stability

图8:核酸/in vivo-jetPEI®复合物长时间保持稳定。将AsiRNA(40µg)与in vivo-jetPEI ®进行混合。4℃放置30分钟或24小时后进行静脉内注射。注射24小时后,用IVIS 100生物成像系统(Caliper-PerkinElmer)来拍摄动物的生物荧光。

如需详细信息,点击附件按钮,下载Bioimaging应用文稿。

12-应用

12.1-体内功能研究

in vivo-jetPEI ®非常适宜体内研究基因功能,而且是最简单的在动物体内验证离体实验结果的方案。

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12.2-肿瘤治疗

in vivo-jetPEI®介导的核酸转染如今被广泛用于肿瘤生长抑制研究。例如:应用in vivo-jetPEI ®转染针对Cyclin B1的siRNA来抑制肺脏转移瘤的形成(图9A),以及针对Survivin的siRNA的in vivo-jetPEI ®转染来阻止移植瘤的生长(图9B)。

in vivo-jetPEI - Cancer therapy

图9:siRNA通过in vivo-jetPEI®转染后的肿瘤生长抑制情况。(A)小鼠静脉注射TSA-Luc细胞,形成肺转移瘤。2天后,小鼠以1mg/kg静脉注射针对细胞周期蛋白B1(N/P=12.5)STICKY siRNA™。10天后,检测生物荧光。数据来自Bonnet et al., (2013), J Control Release 170(2) :183-90(B)带有异体瘤的小鼠以1mg/kg静脉注射针对Survivin(N/P=12.5)的STICKY siRNA™。每次注射后检测肿瘤生长情况,用肿瘤体积平均值± SEM来表示。数据来自Kedinger et al.,(2013)BMC Cancer13:338。

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12.3-疫苗接种/免疫

应用in vivo-jetPEI ®进行质粒DNA体内注射后,所表达的蛋白质会引起强劲而持久的免疫反应,从而保护动物免遭不同病毒或病原体的侵扰。

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12.4-使用CRISPR/Cas9系统进行体内基因编辑

in vivo-jetPEI介导的CRISPR/Cas9系统靶向抑癌基因,是研究功能缺失改变以及对肿瘤生成影响的灵活和有效的方法。

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13-品质

Polyplus-transfection®自2002年起通过ISO 9001质量管理体系认证,该认证等级向全球客户保证通过该等级认证的供应商能够提供可靠而有效的产品开发、制造、销售及客户支持。每批次in vivo-jetPEI ®都通过通过小鼠静脉注射DNA(pCMV-荧光素酶)的实验进行功能验证。每批试剂的分析证书上都标示每mg蛋白质中荧光素酶的数量。此外,对每批in vivo-jetPEI®都确保无内毒素。